Þakka þér fyrir að heimsækja Nature.com. Vafraútgáfan sem þú notar hefur takmarkaðan CSS stuðning. Til að ná sem bestum árangri mælum við með að nota nýrri vafra (eða slökkva á eindrægnistillingu í Internet Explorer). Í millitíðinni, til að tryggja áframhaldandi stuðning, munum við birta síðuna án stíla og JavaScript.
Stofnun dýralíkana um modic change (MC) er mikilvægur grunnur til að rannsaka MC. Fimmtíu og fjórum nýsjálenskum hvítum kanínum var skipt í sýndaraðgerðahóp, vöðvaígræðsluhóp (ME hópur) og ígræðsluhóp fyrir kjarna pulposus (NPE hópur). Í NPE hópnum var millihryggjarskífan afhjúpuð með framhlið lendarhryggjaraðgerðar og nál var notuð til að stinga L5 hryggjarliðnum nálægt endaplötunni. NP var dregið úr L1/2 millihryggjarskífunni með sprautu og sprautað í hann. Að bora gat í subchondral beinið. Skurðaðgerðir og borunaraðferðir í vöðvaígræðsluhópnum og sýndaraðgerðahópnum voru þær sömu og í NP ígræðsluhópnum. Í ME hópnum var vöðvastykki sett í holuna en í sýndaraðgerðarhópnum var ekkert sett í holuna. Eftir aðgerðina var MRI skönnun og sameindalíffræðileg próf gerð. Merkið í NPE hópnum breyttist, en engin augljós merkjabreyting var í sýndaraðgerðahópnum og ME hópnum. Vefjafræðileg athugun sýndi að óeðlileg vefjafjölgun sást á ígræðslustaðnum og tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ var aukin í NPE hópnum. Ígræðsla NP í subchondral bein getur myndað dýralíkan af MC.
Modic breytingar (MC) eru skemmdir á endaplötum hryggjarliða og aðliggjandi beinmerg sem sjást á segulómun (MRI). Þau eru nokkuð algeng hjá einstaklingum með tilheyrandi einkenni1. Margar rannsóknir hafa lagt áherslu á mikilvægi MC vegna tengsla þess við mjóbaksverki (LBP)2,3. de Roos o.fl.4 og Modic o.fl.5 lýstu sjálfstætt fyrst þremur mismunandi tegundum af óeðlilegum merkjum undir æðar í hryggjarliðnum. Modic tegund I breytingar eru lágstyrkur á T1-vigtar (T1W) raðir og ofursterkar á T2-vigtar (T2W) raðir. Þetta mein sýnir sprunguendaplötur og aðliggjandi æðakornavef í beinmerg. Modic gerð II breytingar sýna hátt merki á bæði T1W og T2W röð. Í þessari tegund meinsemda má finna eyðingu endaplata, auk vefjafræðilegrar fituuppbótar á aðliggjandi beinmerg. Modic gerð III breytingar sýna lágt merki í T1W og T2W röð. Sclerotic sár sem samsvara endaplötum hafa sést6. MC er talinn sjúklegur sjúkdómur í hrygg og er nátengdur mörgum hrörnunarsjúkdómum í hryggnum7,8,9.
Miðað við fyrirliggjandi gögn hafa nokkrar rannsóknir veitt ítarlega innsýn í orsökum og meinafræðilegum aðferðum MC. Albert o.fl. benti til þess að MC gæti stafað af diskusliti8. Hu o.fl. rekja MC til alvarlegrar hrörnunar disks10. Kroc setti fram hugmyndina um „innra diskurrof“ sem segir að endurtekið áverka á diski geti leitt til örtára í endaplötunni. Eftir klofmyndun getur eyðilegging endaplata af völdum nucleus pulposus (NP) kallað fram sjálfsofnæmissvörun, sem leiðir enn frekar til þróunar MC11. Ma o.fl. deildi svipaðri skoðun og greindi frá því að sjálfsofnæmi af völdum NP gegni lykilhlutverki í meingerð MC12.
Ónæmiskerfisfrumur, sérstaklega CD4+ T hjálpareitilfrumur, gegna mikilvægu hlutverki í meingerð sjálfsofnæmis13. Nýlega uppgötvað Th17 undirhópurinn framleiðir bólgueyðandi frumuvakann IL-17, stuðlar að tjáningu kemokíns og örvar T frumur í skemmdum líffærum til að framleiða IFN-γ14. Th2 frumur gegna einnig einstöku hlutverki í meingerð ónæmissvörunar. Tjáning á IL-4 sem dæmigerð Th2 frumu getur leitt til alvarlegra ónæmissjúkdómafræðilegra afleiðinga15.
Þrátt fyrir að margar klínískar rannsóknir hafi verið gerðar á MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, þá er enn skortur á hentugum dýratilraunum sem geta líkt eftir MC ferlinu sem oft á sér stað í mönnum og getur verið notað til að kanna orsök eða nýjar meðferðir eins og markvissa meðferð. Hingað til hefur aðeins verið greint frá örfáum dýralíkönum af MC til að rannsaka undirliggjandi meinafræðilega aðferðir.
Byggt á sjálfsofnæmiskenningunni sem Albert og Ma settu fram, kom þessi rannsókn á einföldu og endurskapanlegu MC líkani fyrir kanínu með því að ígræða NP nálægt boruðu hryggjarendaplötunni. Önnur markmið eru að fylgjast með vefjafræðilegum eiginleikum dýralíkönanna og meta sérstaka aðferð NP við þróun MC. Í þessu skyni notum við tækni eins og sameindalíffræði, MRI og vefjafræðilegar rannsóknir til að rannsaka framvindu MC.
Tvær kanínur dóu úr blæðingum í aðgerð og fjórar kanínur dóu við svæfingu við segulómun. Hinar 48 kanínur lifðu af og sýndu engin hegðunar- eða taugafræðileg einkenni eftir aðgerð.
MRI sýnir að merkjastyrkur innfellda vefsins í mismunandi holum er mismunandi. Merkjastyrkur L5 hryggjarliðsins í NPE hópnum breyttist smám saman 12, 16 og 20 vikum eftir ísetningu (T1W röð sýndi lágt merki og T2W röð sýndi blandað merki auk lágt merki) (Mynd 1C), á meðan segulómunarröð sýndi lítið merki af hinum tveimur hópunum af innfelldum hlutum var tiltölulega stöðugt á sama tímabili (mynd 1A, B).
(A) Fulltrúar raðmyndatökur á lendhrygg í kanínu á 3 tímapunktum. Engin merki frávik fundust á myndum af sýndaraðgerðarhópnum. (B) Merkjaeiginleikar hryggjarliðsins í ME hópnum eru svipaðir og í sýndaraðgerðahópnum og engin marktæk merkjabreyting sést á innfellingarstaðnum með tímanum. (C) Í NPE hópnum er lágt merki greinilega sýnilegt í T1W röðinni og blandað merki og lágt merki eru greinilega sýnilegt í T2W röðinni. Frá 12 vikna tímabilinu til 20 vikna tímabilsins lækkar einstaka há merki sem umlykja lág merki í T2W röðinni.
Augljós ofvöxtur beina má sjá á ígræðslustað hryggjarliðsins í NPE hópnum og beinstækkun á sér stað hraðar frá 12 til 20 vikum (Mynd 2C) samanborið við NPE hópinn, engin marktæk breyting sést á hryggjarliðnum sem gerð er fyrirmynd. líkamar; Sýndarhópur og ME hópur (Mynd 2C) 2A,B).
(A) Yfirborð hryggjarliðsins við ígrædda hlutann er mjög slétt, gatið grær vel og það er engin ofvöxtur í hryggjarliðnum. (B) Lögun ígræðslustaðarins í ME hópnum er svipuð og í sýndaraðgerðahópnum og það er engin augljós breyting á útliti ígræðslusvæðisins með tímanum. (C) Ofvöxtur beina átti sér stað á ígræðslustaðnum í NPE hópnum. Ofvöxtur beina jókst hratt og náði jafnvel í gegnum millihryggjarskífuna til hliðar hryggjarliðsins.
Vefjagreining veitir ítarlegri upplýsingar um beinmyndun. Mynd 3 sýnir ljósmyndir af hlutum eftir aðgerð litaðar með H&E. Í sýndaraðgerðahópnum var kondrocytunum vel raðað og engin frumufjölgun greindist (mynd 3A). Staðan í ME hópnum var svipuð og í sýndaraðgerðahópnum (mynd 3B). Hins vegar, í NPE hópnum, sást mikill fjöldi chondrocytes og fjölgun NP-líkra frumna á ígræðslustaðnum (mynd 3C);
(A) Trabeculae má sjá nálægt endaplötunni, chondrocytes eru snyrtilega raðað með einsleitri frumustærð og lögun og enga fjölgun (40 sinnum). (B) Ástand ígræðslustaðarins í ME hópnum er svipað og í sýndarhópnum. Hægt er að sjá trabeculae og chondrocytes, en það er engin augljós fjölgun á ígræðslustaðnum (40 sinnum). (B) Það má sjá að chondrocytes og NP-líkar frumur fjölga sér verulega og lögun og stærð chondrocytes eru ójöfn (40 sinnum).
Tjáning á interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA og interferon γ (IFN-γ) mRNA sást bæði í NPE og ME hópunum. Þegar tjáningarmagn markgena var borið saman jókst genatjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ marktækt í NPE hópnum samanborið við ME hópinn og sýndaraðgerðahópinn (mynd 4). (P < 0,05). Í samanburði við sýndaraðgerðahópinn jókst tjáningarstig IL-4, IL-17 og IFN-γ í ME hópnum aðeins lítillega og náði ekki tölfræðilegri breytingu (P > 0,05).
MRNA tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ í NPE hópnum sýndi marktækt meiri þróun en í sýndaraðgerðahópnum og ME hópnum (P < 0,05).
Aftur á móti sýndu tjáningarstig í ME hópnum engan marktækan mun (P>0,05).
Western blot greining var gerð með því að nota mótefni gegn IL-4 og IL-17 sem fást í verslunum til að staðfesta breytt mRNA tjáningarmynstur. Eins og sést á myndum 5A,B, samanborið við ME hópinn og sýndaraðgerðahópinn, var próteinmagn IL-4 og IL-17 í NPE hópnum marktækt aukið (P <0,05). Í samanburði við sýndaraðgerðahópinn náði próteinmagn IL-4 og IL-17 í ME hópnum ekki heldur tölfræðilega marktækar breytingar (P> 0,05).
(A) Próteinmagn IL-4 og IL-17 í NPE hópnum var marktækt hærra en í ME hópnum og lyfleysu hópnum (P < 0,05). (B) Western blot súlurit.
Vegna takmarkaðs fjölda sýna úr mönnum sem fengust við skurðaðgerð eru skýrar og nákvæmar rannsóknir á meingerð MC nokkuð erfiðar. Við reyndum að koma á dýralíkani af MC til að rannsaka hugsanlega meinafræðilega aðferð þess. Á sama tíma var geislafræðilegt mat, vefjafræðilegt mat og sameindalíffræðilegt mat notað til að fylgja ferli MC framkallað af NP sjálfsígræðslu. Fyrir vikið leiddi NP ígræðslulíkanið til hægfara breytingu á merkistyrk frá 12 vikna í 20 vikna tímapunktum (blandað lágt merki í T1W raðir og lítið merki í T2W raðir), sem gefur til kynna vefjabreytingar, og vefjafræðilega og sameindafræðilega líffræðilegt mat staðfesti niðurstöður geislarannsóknarinnar.
Niðurstöður þessarar tilraunar sýna að sjónrænar og vefjafræðilegar breytingar áttu sér stað á stað þar sem hryggjarliðsbrotið var brotið í NPE hópnum. Á sama tíma sást tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ gena, sem og IL-4, IL-17 og IFN-γ, sem bendir til þess að brot á samgengum kjarna pulposus vef í hryggjarliðnum. líkaminn getur valdið röð merkja og formfræðilegra breytinga. Auðvelt er að komast að því að merkjaeiginleikar hryggjarliða dýralíkanssins (lítið merki í T1W röðinni, blandað merki og lágt merki í T2W röðinni) eru mjög svipaðir og hryggjarliðsfrumur úr mönnum, og segulómunareiginleikar einnig staðfesta athuganir á vefjafræði og grófri líffærafræði, það er að segja að breytingar á hryggjarliðsfrumum eru stigvaxandi. Þrátt fyrir að bólgusvörun af völdum bráðs áverka gæti komið fram fljótlega eftir stungu sýndu niðurstöður segulómun að stigvaxandi merkjabreytingar komu fram 12 vikum eftir stungu og hélst í allt að 20 vikur án þess að nokkur merki um bata eða snúning á breytingum á segulómun hafi verið viðvarandi. Þessar niðurstöður benda til þess að samgengt NP í hryggjarliðum sé áreiðanleg aðferð til að koma á framsæknu MV í kanínum.
Þetta gatalíkan krefst fullnægjandi færni, tíma og skurðaðgerðar. Í fortilraunum getur krufning eða óhófleg örvun á liðböndum í hryggjarliðum leitt til myndunar hryggjarliða. Gæta skal þess að skemma ekki eða ergja aðliggjandi diska. Þar sem stýra þarf inndýptardýptinni til að ná stöðugum og endurskapanlegum niðurstöðum, gerðum við tappa handvirkt með því að klippa slíður af 3 mm langri nál. Notkun þessa tappa tryggir samræmda bordýpt í hryggjarliðnum. Í frumtilraunum fannst þremur bæklunarskurðlæknum sem tóku þátt í aðgerðinni auðveldara að vinna með 16 gauge nálar en 18 gauge nálar eða aðrar aðferðir. Til að koma í veg fyrir of miklar blæðingar meðan á borun stendur mun það að halda nálinni kyrrri í smá stund veita hentugra ísetningargat, sem bendir til þess að hægt sé að stjórna ákveðnu MC á þennan hátt.
Þrátt fyrir að margar rannsóknir hafi beinst að MC, er lítið vitað um orsök og meingerð MC25,26,27. Byggt á fyrri rannsóknum okkar komumst við að því að sjálfsofnæmi gegnir lykilhlutverki í tilkomu og þróun MC12. Þessi rannsókn kannaði megindlega tjáningu IL-4, IL-17 og IFN-γ, sem eru helstu aðgreiningarleiðir CD4+ frumna eftir mótefnavakaörvun. Í rannsókn okkar, samanborið við neikvæða hópinn, hafði NPE hópurinn meiri tjáningu á IL-4, IL-17 og IFN-γ og próteinmagn IL-4 og IL-17 var einnig hærra.
Klínískt er tjáning IL-17 mRNA aukin í NP-frumum frá sjúklingum með diskusbrot28. Aukin IL-4 og IFN-γ tjáningarstig fundust einnig í bráðri, óþjöppuðu diskuslitslíkani samanborið við heilbrigða viðmiðunarhópa29. IL-17 gegnir lykilhlutverki í bólgu, vefjaskaða í sjálfsofnæmissjúkdómum30 og eykur ónæmissvörun við IFN-γ31. Greint hefur verið frá auknum IL-17-miðluðum vefjaskaða í MRL/lpr músum32 og sjálfsofnæmisnæmum músum33. IL-4 getur hamlað tjáningu bólgueyðandi frumudrepna (eins og IL-1β og TNFα) og virkjun átfrumna34. Greint var frá því að mRNA tjáning IL-4 væri öðruvísi í NPE hópnum samanborið við IL-17 og IFN-γ á sama tímapunkti; MRNA tjáning IFN-γ í NPE hópnum var marktækt hærri en í hinum hópunum. Þess vegna getur IFN-γ framleiðsla verið miðill bólgusvörunar sem framkallað er af NP innskot. Rannsóknir hafa sýnt að IFN-γ er framleitt af mörgum frumugerðum, þar á meðal virkum T-hjálparfrumum af tegund 1, náttúrulegum drápsfrumum og átfrumum35,36, og er bólgueyðandi frumufrumur sem stuðlar að ónæmissvörun37.
Þessi rannsókn bendir til þess að sjálfsofnæmissvörun geti átt þátt í tilkomu og þróun MC. Luoma o.fl. komst að því að merkjaeiginleikar MC og áberandi NP eru svipaðir á segulómun og báðir sýna hátt merki í T2W röð38. Staðfest hefur verið að sum cýtókín séu nátengd tilviki MC, eins og IL-139. Ma o.fl. benti til þess að útskot NP upp á við eða niður gæti haft mikil áhrif á tilkomu og þróun MC12. Bobechko40 og Herzbein et al.41 greindu frá því að NP er ónæmisþolinn vefur sem kemst ekki inn í æðakerfið frá fæðingu. NP útskot koma aðskotahlutum inn í blóðrásina og miðla þar með staðbundnum sjálfsofnæmisviðbrögðum42. Sjálfsofnæmisviðbrögð geta framkallað fjölda ónæmisþátta og þegar þessir þættir eru stöðugt útsettir fyrir vefjum geta þeir valdið breytingum á merkjum43. Í þessari rannsókn eru oftjáning á IL-4, IL-17 og IFN-γ dæmigerðir ónæmisþættir, sem sanna enn frekar náið samband milli NP og MCs44. Þetta dýralíkan líkir vel eftir NP-byltingunni og innkomu í endaplötuna. Þetta ferli leiddi enn frekar í ljós áhrif sjálfsofnæmis á MC.
Eins og búist var við veitir þetta dýralíkan okkur mögulegan vettvang til að rannsaka MC. Hins vegar hefur þetta líkan enn nokkrar takmarkanir: Í fyrsta lagi, á meðan á dýraskoðun stendur, þarf að aflífa sumar kanínur á millistigi til að prófa vefja- og sameindalíffræði, þannig að sum dýr „falla úr notkun“ með tímanum. Í öðru lagi, þrátt fyrir að þrír tímapunktar séu settir í þessari rannsókn, þá gerðum við því miður aðeins eina tegund af MC (Modic type I change), þannig að það er ekki nóg til að tákna þróun sjúkdómsþróunarferlis í mönnum, og fleiri tímapunkta þarf að stilla á fylgjast betur með öllum merkjabreytingum. Í þriðja lagi er vissulega hægt að sýna breytingar á uppbyggingu vefja með vefjafræðilegri litun, en sumar sérhæfðar aðferðir geta betur leitt í ljós örbyggingarbreytingar í þessu líkani. Til dæmis var skautuð ljóssmásjá notuð til að greina myndun trefjabrjósks í millihryggjarskífum kanína45. Langtímaáhrif NP á MC og endaplötu krefjast frekari rannsókna.
Fimmtíu og fjórum karlkyns hvítum kanínum frá Nýja Sjálandi (þyngd um 2,5-3 kg, aldur 3-3,5 mánaða) var skipt af handahófi í sýndaraðgerðahóp, vöðvaígræðsluhóp (ME hópur) og taugarótígræðsluhóp (NPE hópur). Allar tilraunaaðferðir voru samþykktar af siðanefnd Tianjin sjúkrahússins og tilraunaaðferðirnar voru gerðar í ströngu samræmi við samþykktar leiðbeiningar.
Nokkrar endurbætur hafa verið gerðar á skurðtækni S. Sobajima 46 . Hver kanína var sett í hliðarlegu stöðu og fremra yfirborð fimm samfellda lenda millihryggjarskífa (IVDs) var afhjúpað með því að nota bakhlið afturkviðarhols. Hver kanína fékk almenna svæfingu (20% þvagefni, 5 ml/kg í gegnum eyrnabláæð). Gerður var lengdarskurður á húð frá neðri brún rifbeina að grindarbotni, 2 cm í kviðarholi til hliðarhryggjarvöðva. Hægri framhlið hryggsins frá L1 til L6 var afhjúpaður með skarpri og bitlausri krufningu á yfirliggjandi undirhúðvef, afturkviðarvef og vöðvum (mynd 6A). Skífustigið var ákvarðað með því að nota grindarbotninn sem líffærafræðilegt kennileiti fyrir L5-L6 skífuna. Notaðu 16-gauge stungnál til að bora gat nálægt endaplötu L5 hryggjarliðsins að 3 mm dýpi (mynd 6B). Notaðu 5 ml sprautu til að soga samgena kjarna pulposus í L1-L2 millihryggjarskífuna (mynd 6C). Fjarlægðu nucleus pulposus eða vöðva í samræmi við kröfur hvers hóps. Eftir að borholið hefur verið dýpkað eru gleypanleg saumar sett á djúpt tjuð, yfirborðshúð og húð og þess gætt að skemma ekki beinhimnuvef hryggjarliðsins meðan á aðgerð stendur.
(A) L5–L6 skífan er afhjúpuð með bakhlið afturkviðarholi. (B) Notaðu 16-gauge nál til að bora gat nálægt L5 endaplötunni. (C) Samgena MF er safnað.
Svæfing var gefin með 20% úretani (5 ml/kg) gefið um eyrnabláæð og röntgenmyndir af lendhrygg voru endurteknar 12, 16 og 20 vikum eftir aðgerð.
Kanínum var fórnað með inndælingu ketamíns í vöðva (25,0 mg/kg) og natríumpentóbarbital í bláæð (1,2 g/kg) 12, 16 og 20 vikum eftir aðgerð. Allur hryggurinn var fjarlægður til vefjagreiningar og raunveruleg greining var framkvæmd. Megindleg öfug umritun (RT-qPCR) og Western blotting voru notuð til að greina breytingar á ónæmisþáttum.
MRI rannsóknir voru gerðar á kanínum með því að nota 3,0 T klínískan segul (GE Medical Systems, Florence, SC) með hornréttum útlimaspólumóttakara. Kanínur voru svæfðar með 20% úretani (5 ml/kg) í gegnum eyrnabláæð og síðan settar liggjandi innan segulsins með lendarhrygginn í miðju á 5 tommu hringlaga yfirborðsspólu (GE Medical Systems). Coronal T2-vigtar staðsetningarmyndir (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) voru teknar til að skilgreina staðsetningu lendardisksins frá L3–L4 til L5–L6. Sagittal plane T2-vigtar sneiðar voru fengnar með eftirfarandi stillingum: hröð snúning-bergmálsröð með endurtekningartíma (TR) upp á 2200 ms og bergmálstíma (TE) upp á 70 ms, fylki; sjónsvið 260 og átta áreiti; Skurðþykktin var 2 mm, bilið var 0,2 mm.
Eftir að síðasta myndin var tekin og síðasta kanínan var drepin voru sýndar-, vöðva- og NP-skífurnar fjarlægðar til vefjarannsóknar. Vefir voru festir í 10% hlutlausu jafnaðri formalíni í 1 viku, kalkaðir með etýlendíamíntetraediksýru og paraffín sneiddir. Vefjablokkir voru felldir inn í paraffín og skornir í sagittal hluta (5 μm þykkt) með því að nota míkrótóm. Hlutar voru litaðir með hematoxýlíni og eósíni (H&E).
Eftir að millihryggjarskífunum var safnað frá kanínum í hverjum hópi var heildar-RNA dregið út með UNIQ-10 súlu (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kína) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda og ImProm II öfugt umritunarkerfi (Promega Inc. , Madison, WI, Bandaríkjunum). Öfug umritun var framkvæmd.
RT-qPCR var framkvæmt með því að nota Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) og SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. PCR hvarfrúmmálið var 20 μl og innihélt 1,5 μl af þynntu cDNA og 0,2 μM af hverjum grunni. Grunnur var hannaður af OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) og framleiddur af Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kína) (tafla 1). Eftirfarandi hitauppstreymisskilyrði voru notuð: upphafsþrep pólýmerasavirkjunar við 94°C í 2 mínútur, síðan 40 lotur af 15 sekúndum hver við 94°C fyrir sniðmátafvæðingu, glæðing í 1 mín við 60°C, framlenging og flúrljómun. mælingar voru gerðar í 1 mín. við 72°C. Öll sýni voru mögnuð þrisvar sinnum og meðalgildi var notað fyrir RT-qPCR greiningu. Mögnunargögn voru greind með FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, Bandaríkjunum). Genatjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ var staðlað í innræna stjórn (ACTB). Hlutfallslegt tjáningarmagn mark-mRNA var reiknað með 2-ΔΔCT aðferðinni.
Heildarprótein var dregið úr vefjum með því að nota vefjajafnara í RIPA lýsispúða (inniheldur próteasa og fosfatasa hemla kokteil) og síðan skilið í skilvindu við 13.000 rpm í 20 mínútur við 4°C til að fjarlægja vefjarusl. Fimmtíu míkrógrömm af próteini voru hlaðin á hverja braut, aðskilin með 10% SDS-PAGE, og síðan flutt yfir á PVDF himnu. Blokkun var framkvæmd í 5% fitulausri þurrmjólk í Tris-buffered saltvatni (TBS) sem innihélt 0,1% Tween 20 í 1 klst við stofuhita. Himnan var ræktuð með kanínum and-decorin aðal mótefni (þynnt 1:200; Boster, Wuhan, Kína) (þynnt 1:200; Bioss, Peking, Kína) yfir nótt við 4°C og hvarf á öðrum dögum; með öðru mótefni (geitur gegn kanínu immúnóglóbúlíni G í 1:40.000 þynningu) ásamt piparrótarperoxidasa (Boster, Wuhan, Kína) í 1 klukkustund við stofuhita. Western blot merki greindust með aukinni efnaljómun á efnaljómandi himnunni eftir röntgengeislun. Fyrir þéttleikagreiningu voru blettir skannaðar og magngreindir með BandScan hugbúnaði og niðurstöðurnar voru gefnar upp sem hlutfall markgena ónæmisvirkni og túbúlínónæmis.
Tölfræðilegir útreikningar voru gerðir með SPSS16.0 hugbúnaðarpakkanum (SPSS, Bandaríkjunum). Gögn sem safnað var meðan á rannsókninni stóð voru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik (meðaltal ± SD) og greind með einstefnu endurteknum mælikvarða dreifnigreiningu (ANOVA) til að ákvarða mun á milli hópanna tveggja. P < 0,05 var talið tölfræðilega marktækt.
Þannig getur stofnun dýralíkans af MC með því að græða samgenga NPs í hryggjarlið og framkvæma stórlíffærafræðilega athugun, segulómunagreiningu, vefjafræðilegu mati og sameindalíffræðilegri greiningu orðið mikilvægt tæki til að meta og skilja gangverk manna MC og þróa nýjar meðferðaraðferðir. inngrip.
Hvernig á að vitna í þessa grein: Han, C. o.fl. Dýralíkan af Modic breytingum var komið á með því að græða samgengan nucleus pulposus í undirbein lendarhryggsins. Sci. Rep 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. og Boos, N. Segulómunarmyndir af lendhrygg: algengi disksbrots og -teppa, taugarótarþjöppun, frávik í endaplötu og liðagigt hjá einkennalausum sjálfboðaliðum . hlutfall. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS og Leboeuf-Eed, K. Modic breytingar og tengsl þeirra við klínískar niðurstöður. European Spine Journal: opinber útgáfa European Spine Society, European Society of Spinal Deformity og European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., o.fl. Óbreyttar breytingar á endaplötum lendarhryggjarliða: algengi og tengsl við mjóbaksverk og sciatica hjá miðaldra karlkyns starfsmönnum. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. og Dalinka, M. Hafrannsóknastofnun á beinmergsbreytingum nálægt endaplötu í hrörnunarsjúkdómi í lendhrygg. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ og Carter, JR Hrörnunarsjúkdómur: mat á breytingum á hryggmerg með segulómun. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS og Carter, JR Myndgreining á hrörnunarsjúkdómi. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, o.fl. Spáþættir um endaplata í taugahrygg (Modic) gefa merki um breytingar hjá almenningi. European Spine Journal: Official Publication of the European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity, and the European Society for Cervical Spine Research, Division 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB og Mannisch, K. Modic breytingar eftir herniation lendar. European Spine Journal : Official Publication of the European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity and the European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., og Kaapa, E. Modic tegund I breytingar geta spáð fyrir um hratt versnandi aflögun diskahrörnunar: 1 árs framsýn rannsókn. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ og Fan, SW Modic breytingar: mögulegar orsakir og framlag til hrörnunar á mjóhrygg. Medical Hypotheses 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Innra diskurbrot. Vandamál með skífufalli yfir 50 ár. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Birtingartími: 13. desember 2024