Þakka þér fyrir að heimsækja Nature.com. Vafrútgáfan sem þú notar hefur takmarkaðan CSS stuðning. Til að ná sem bestum árangri mælum við með að nota nýrri vafra (eða slökkva á eindrægni í Internet Explorer). Í millitíðinni, til að tryggja áframhaldandi stuðning, munum við sýna vefinn án stíl og JavaScript.
Stofnun dýralíkana af líkamlegum breytingum (MC) er mikilvægur grunnur til að rannsaka MC. Fimmtíu og fjórum hvítum kanínum Nýja-Sjálands var skipt í hópinn sem er aðgerð, vöðvaígræðsluhópur (ME hópur) og ígræðsluhópur Nucleus Pulposus (NPE). Í NPE hópnum var intervertebral diskurinn afhjúpaður með skurðaðgerð á lendarhrygg og nál var notuð til að stinga L5 hryggjarliðið nálægt endaplötunni. NP var dregið út úr L1/2 millistigsskífunni með sprautu og sprautað í hann. Bora gat í beinbeininu. Skurðaðgerðir og borunaraðferðir í vöðvaígræðsluhópnum og skammarhópurinn voru þær sömu og í NP ígræðsluhópnum. Í ME-hópnum var stykki af vöðva komið fyrir í holuna, en í skammarhópnum var ekkert sett í gatið. Eftir aðgerðina voru MRI skönnun og sameindalíffræðilegar prófanir gerðar. Merkið í NPE hópnum breyttist, en það var engin augljós merkibreyting í skammarhópnum og ME hópnum. Vefjafræðileg athugun sýndi að óeðlileg útbreiðsla vefja sást á ígræðslustaðnum og tjáning IL-4, IL-17 og IFN-y jókst í NPE hópnum. Ígræðsla NP í undirdráttarsteinið getur myndað dýralíkan af MC.
Modískar breytingar (MC) eru skemmdir á endaplötum hryggjarliðs og aðliggjandi beinmerg sýnileg á segulómun (Hafrannsóknastofnun). Þeir eru nokkuð algengir hjá einstaklingum með tilheyrandi einkenni1. Margar rannsóknir hafa lagt áherslu á mikilvægi MC vegna tengsla þess við litla bakverk (LBP) 2,3. De Roos o.fl.4 og Modic o.fl.5 lýstu sjálfstætt þremur mismunandi gerðum af frávikum undirkorða merkja í beinmerg í hrygg. Breytingar á tegund I eru hypointense á T1-veginni (T1W) röð og ofvirkni á T2-vegnum (T2W) röð. Þessi meinsemd sýnir sprungu endaplötur og aðliggjandi æðakornvef í beinmerg. Breytingar á tegund II sýna hátt merki bæði á T1W og T2W röð. Í þessari tegund af meinsemd er að finna eyðileggingu endaplata, svo og vefjafræðilega fituuppbót á aðliggjandi beinmerg. Breytingar af gerð III sýna lítið merki í T1W og T2W röð. Sclerotic sár sem samsvara endplötunum hafa sést6. MC er talinn meinafræðilegur sjúkdómur í hryggnum og er nátengdur mörgum hrörnunarsjúkdómum í hryggnum7,8,9.
Miðað við fyrirliggjandi gögn hafa nokkrar rannsóknir veitt ítarlega innsýn í etiology og meinafræðilega fyrirkomulag MC. Albert o.fl. lagði til að MC gæti stafað af DISC herniation8. Hu o.fl. Rafið MC til alvarlegrar hrörnun í skífunni. Kroc lagði til hugtakið „rof í innri disk“, þar sem segir að endurteknar áverka á diskum gæti leitt til örtyrra í endaplötunni. Eftir myndun klofsins getur eyðilegging endplata með kjarna pulposus (NP) kallað fram sjálfsofnæmissvörun, sem leiðir ennfremur til þróunar MC11. Ma o.fl. deildi svipaðri skoðun og greindi frá því að sjálfsnæmisvökvi af völdum NP gegni lykilhlutverki í meingerð MC12.
Ónæmiskerfisfrumur, sérstaklega CD4+ T hjálpar eitilfrumur, gegna mikilvægu hlutverki í meingerð sjálfsnæmis13. Nýlega uppgötvaði Th17 undirmengi framleiðir frumubólgu cýtókín IL-17, stuðlar að tjáningu chemokine og örvar T frumur í skemmdum líffærum til að framleiða IFN-γ14. Th2 frumur gegna einnig einstakt hlutverk í meingerð ónæmissvörunar. Tjáning IL-4 sem dæmigerða Th2 frumu getur leitt til alvarlegra ónæmisbólgufræðilegra afleiðinga15.
Þrátt fyrir að margar klínískar rannsóknir hafi verið gerðar á MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, þá skortir enn viðeigandi dýratilraunamódel sem geta líkja eftir MC ferlinu sem oft kemur fram hjá mönnum og getur verið Notað til að kanna orsök eða nýjar meðferðir eins og markviss meðferð. Hingað til hefur aðeins verið greint frá því að fáein dýralíkön af MC rannsakaði undirliggjandi meinafræðilega fyrirkomulag.
Byggt á sjálfsofnæmiskenningunni sem Albert og MA lagði til, stofnaði þessi rannsókn einfalda og fjölföldun Rabbit MC líkans með sjálfvirkri ígræðslu NP nálægt boruðu hryggjarhylkinu. Önnur markmið eru að fylgjast með vefjafræðilegum einkennum dýralíkana og meta sérstaka fyrirkomulag NP við þróun MC. Í þessu skyni notum við tækni eins og sameindalíffræði, Hafrannsóknastofnun og vefjafræðir til að kanna framvindu MC.
Tvær kanínur létust úr blæðingum við skurðaðgerð og fjórar kanínur létust við svæfingu við Hafrannsóknastofnunina. 48 kanínurnar sem eftir voru lifðu af og sýndu engin hegðunar- eða taugasjúkdóm eftir aðgerð.
Hafrannsóknastofnunin sýnir að merkisstyrkur innfellda vefsins í mismunandi götum er mismunandi. Merkisstyrkur L5 hryggjarliðsins í NPE hópnum breyttist smám saman við 12, 16 og 20 vikum eftir innsetningu (T1W röð sýndi lítið merki, og T2W röð sýndi blandað merki auk lágt merki) (mynd 1C), en MRI útlitið Af hinum tveimur hópunum sem eru innbyggðir hlutar hélst tiltölulega stöðugir á sama tímabili (mynd 1A, B).
(A) Fulltrúi raðrannsóknarstofnunar í lendarhrygg í kanínu á 3 tímapunktum. Engin frávik á merkjum fundust í myndum af skammarhópnum. (B) Merkiseinkenni hryggjarliðsins í ME-hópnum eru svipuð og í skammarhópnum og engin marktæk merkisbreyting sést á innbyggingarstaðnum með tímanum. (C) Í NPE hópnum er lágt merkið greinilega sýnilegt í T1W röðinni og blandaða merkið og lágt merki eru greinilega sýnileg í T2W röðinni. Frá 12 vikna tímabilinu til 20 vikna tímabilsins lækka sporadísk há merki um lágt merki í T2W röðinni.
Augljós bein ofvöxtur má sjá á ígræðslustað hryggjarliðsins í NPE hópnum og beinvöxturinn á sér stað hraðar frá 12 til 20 vikum (mynd 2C) samanborið við NPE hópinn, engin marktæk breyting sést í módelum hryggjarliðum. lík; Sham Group og ME hópur (mynd 2C) 2A, B).
(A) Yfirborð hryggjarliðsins við ígrædda hlutann er mjög slétt, gatið gróa vel og það er engin ofvöxtur í hryggjarliðum. (B) Lögun ígrædds stað í ME hópnum er svipuð og í Sham Operation Group og það er engin augljós breyting á útliti ígrædda staðsins með tímanum. (C) Bein ofvöxtur átti sér stað á ígrædda staðnum í NPE hópnum. Bein ofvöxtur jókst hratt og lengdist jafnvel í gegnum millirdiskinn í andstæða hryggjarliðsins.
Vefjafræðileg greining veitir ítarlegri upplýsingar um beinmyndun. Mynd 3 sýnir ljósmyndir af eftir aðgerð sem litaðar eru með H&E. Í skammarhópnum voru kondrocytes vel raðað og engin frumufjölgun greindist (mynd 3A). Ástandið í ME-hópnum var svipað og í skammarhópnum (mynd 3B). Í NPE hópnum sást hins vegar mikill fjöldi kondrocytes og útbreiðslu NP-líkra frumna á ígræðslustaðnum (mynd 3C);
(A) Hægt er að sjá trabeculae nálægt endaplötunni, kondrocytes er snyrtilega raðað með einsleitri frumustærð og lögun og engin útbreiðsla (40 sinnum). (B) Ástand ígræðslustaðarins í ME hópnum er svipað og í Sham Group. Hægt er að sjá trabeculae og chondrocytes, en það er engin augljós útbreiðsla á ígræðslustaðnum (40 sinnum). (B) Það má sjá að kondrocytes og NP-líkar frumur fjölga verulega og lögun og stærð kondrocytes eru ójöfn (40 sinnum).
Tjáning interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA og interferon γ (IFN-γ) mRNA sáust bæði í NPE og ME hópunum. Þegar tjáningarstig markgena var borið saman, voru genatjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ marktækt aukin í NPE hópnum samanborið við þá sem voru í ME hópnum og skammaraðgerðinni (mynd 4) (P <0,05). Í samanburði við skammaraðgerðarhópinn jókst tjáningarstig IL-4, IL-17 og IFN-y í ME hópnum aðeins lítillega og náðu ekki tölfræðilegum breytingum (p> 0,05).
MRNA tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ í NPE hópnum sýndi marktækt meiri þróun en í skammaraðgerðarhópnum og ME hópnum (p <0,05).
Aftur á móti sýndu tjáningarstig í ME hópnum engan marktækan mun (p> 0,05).
Western blot greining var framkvæmd með því að nota mótefni sem eru fáanleg í atvinnuskyni gegn IL-4 og IL-17 til að staðfesta breytt mRNA tjáningarmynstur. Eins og sýnt er á myndum 5a, B, samanborið við ME hópinn og skammaraðgerðarhópinn, var próteinmagn IL-4 og IL-17 í NPE hópnum verulega aukin (P <0,05). Í samanburði við skammaraðgerðarhópinn tókst próteinmagn IL-4 og IL-17 í ME hópnum ekki að ná tölfræðilega marktækum breytingum (p> 0,05).
(A) Próteinmagn IL-4 og IL-17 í NPE hópnum var marktækt hærra en í ME hópnum og lyfleysuhópnum (p <0,05). (B) Western blot súlurit.
Vegna takmarkaðs fjölda manna sýna sem fengin voru við skurðaðgerð eru skýrar og ítarlegar rannsóknir á meingerð MC nokkuð erfiðar. Við reyndum að koma á dýralíkani af MC til að kanna mögulega meinafræðilega fyrirkomulag þess. Á sama tíma var geislafræðilegt mat, vefjafræðilegt mat og sameindalíffræðilegt mat notað til að fylgja gangi MC af völdum NP Autograft. Fyrir vikið leiddi NP ígræðslulíkanið til smám saman breytinga á styrkleika merkja frá 12 vikna til 20 vikna tímapunkta (blandað lágt merki í T1W röð og lágt merki í T2W röð), sem bendir til vefjabreytingar, og vefjafræðilegar og sameindar Líffræðilegt mat staðfesti niðurstöður geislafræðinnar.
Niðurstöður þessarar tilraunar sýna að sjónrænar og vefjafræðilegar breytingar áttu sér stað á staðnum brot á hryggjarliðum í NPE hópnum. Á sama tíma sást tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ gena, svo og IL-4, IL-17 og IFN-γ, sem benti til þess að brot á sjálfvirkum kjarnaplötuvef í hryggjarliðum í hryggjarliðum í hryggjarliðum í hryggjarlið Líkami getur valdið röð merkja og formfræðilegra breytinga. Það er auðvelt að komast að því að merkiseinkenni hryggjarliðanna í dýralíkaninu (lágt merki í T1W röðinni, blandað merki og lágt merki í T2W röðinni) eru mjög svipuð og í hryggfrumum manna, og MRI einkenni einnig Staðfestu athuganir á vefjafræði og grófri líffærafræði, það er að segja að breytingar á hryggjarliðum eru framsæknar. Þrátt fyrir að bólgusvörun af völdum bráðra áfalla geti birst fljótlega eftir stungu, sýndu niðurstöður Hafrannsóknastofnunar að smám saman að auka merkisbreytingar birtust 12 vikum eftir stungu og hélst allt að 20 vikur án nokkurra merkja um bata eða afturköllun á Hafrannsóknastofnuninni. Þessar niðurstöður benda til þess að sjálfvirkt NP hryggjarlið sé áreiðanleg aðferð til að koma á framsæknum MV hjá kanínum.
Þetta stungulíkan krefst fullnægjandi færni, tíma og skurðaðgerðar. Í bráðabirgðatilraunum getur krufning eða óhófleg örvun á liðbandsbyggingu paravertebral leitt til myndunar beinþynningar. Gæta skal þess að skemma ekki eða pirra aðliggjandi diska. Þar sem stýrt verður dýpt skarpskyggni til að ná stöðugum og endurtakanlegum árangri gerðum við handvirkt tappa með því að skera af slíðri 3 mm löngum nál. Notkun þessa tappa tryggir samræmda boradýpt í hryggjarliðum. Í frumtilraunum fundu þrír bæklunarskurðlæknar sem taka þátt í aðgerðinni 16 gauge nálar auðveldara að vinna með en 18 gauge nálar eða aðrar aðferðir. Til að forðast óhóflegar blæðingar við boranir, með því að halda nálinni enn um skeið mun veita heppilegri innsetningargat, sem bendir til þess að hægt sé að stjórna ákveðnu stigi MC með þessum hætti.
Þrátt fyrir að margar rannsóknir hafi miðað MC er lítið vitað um etiology og meingerð MC25,26,27. Byggt á fyrri rannsóknum okkar komumst við að því að sjálfsofnæmi gegnir lykilhlutverki í atburði og þróun MC12. Þessi rannsókn skoðaði megindlega tjáningu IL-4, IL-17 og IFN-γ, sem eru helstu aðgreiningarleiðir CD4+ frumna eftir örvun mótefnavaka. Í rannsókn okkar, samanborið við neikvæða hópinn, hafði NPE hópurinn meiri tjáningu IL-4, IL-17 og IFN-γ, og próteinmagn IL-4 og IL-17 voru einnig hærri.
Klínískt er IL-17 mRNA tjáning aukin í NP frumum frá sjúklingum með DISC herniation28. Aukið IL-4 og IFN-γ tjáningarstig fannst einnig í bráðum, sem ekki voru fullþyrmingar, samanborið við heilbrigða samanburð29. IL-17 gegnir lykilhlutverki í bólgu, vefjaskemmdum við sjálfsofnæmissjúkdóma30 og eykur ónæmissvörun við IFN-y31. Greint hefur verið frá aukinni IL-17-miðluðum vefjaskemmdum í MRL/LPR músum32 og sjálfsofnæmisgildum músum33. IL-4 getur hindrað tjáningu frumubólgufrumna (svo sem IL-1β og TNFa) og virkjun átfrumna34. Sagt var frá því að mRNA tjáning IL-4 væri mismunandi í NPE hópnum samanborið við IL-17 og IFN-γ á sama tímapunkti; MRNA tjáning IFN-y í NPE hópnum var marktækt hærri en í hinum hópunum. Þess vegna getur IFN-γ framleiðsla verið sáttasemjari bólgusvörunar af völdum NP samtengingar. Rannsóknir hafa sýnt að IFN-γ er framleitt af mörgum frumum, þar með talið virkjuðum T-frumum af gerð 1, náttúrulegum morðingjafrumum og átfrumum35,36, og er lykilbólgufrumur sem stuðla að ónæmissvörun37.
Þessi rannsókn bendir til þess að sjálfsofnæmissvörun geti verið þátttakandi í atburði og þróun MC. Luoma o.fl. komst að því að merkiseinkenni MC og áberandi NP eru svipuð á Hafrannsóknastofnuninni og bæði sýna hátt merki í T2W röð38. Staðfest hefur verið að sumar frumur hafa verið nátengdar tilkomu MC, svo sem IL-139. Ma o.fl. lagði til að útbreiðsla NP upp eða niður geti haft mikil áhrif á tíðni og þróun MC12. Bobechko40 og Herzbein o.fl.41 greindu frá því að NP væri ónæmisþolandi vefur sem getur ekki farið inn í æðarrásina frá fæðingu. NP útstæð kynnir erlendir aðilar í blóðflæði og miðlar þar með staðbundnum sjálfsofnæmisviðbrögðum42. Sjálfsofnæmisviðbrögð geta valdið miklum fjölda ónæmisþátta og þegar þessir þættir eru stöðugt útsettir fyrir vefjum geta þeir valdið breytingum á merkjasendingum43. Í þessari rannsókn eru ofþrýstingur á IL-4, IL-17 og IFN-γ dæmigerðir ónæmisþættir, sem sanna enn náið samband NP og MCS44. Þessi dýralíkan líkir vel eftir NP byltingunni og inngöngu í endaplötuna. Þetta ferli leiddi ennfremur í ljós áhrif sjálfsnæmis á MC.
Eins og búast mátti við veitir þetta dýralíkan okkur mögulegan vettvang til að rannsaka MC. Samt sem áður hefur þetta líkan enn nokkrar takmarkanir: í fyrsta lagi, á meðan á athugunarstiginu stóð, þarf að aflífa á nokkrum millistigum kanínum vegna prófunar á vefjafræðilegum og sameindalíffræði, þannig að sum dýr „falla úr notkun“ með tímanum. Í öðru lagi, þó að þrjú tímapunkta séu sett í þessa rannsókn, því miður, fyrirmynduðum við aðeins eina tegund af MC (Modic Typ Fylgstu betur með öllum merkjaskiptum. Í þriðja lagi er örugglega hægt að sýna fram á breytingar á vefjaskipulagi með vefjafræðilegri litun, en sumar sérhæfðar aðferðir geta betur leitt í ljós smásjárbreytingar á þessu líkani. Til dæmis var skautað ljós smásjá notuð til að greina myndun fibrocartilage í kanínu milliveggsskífum45. Langtímaáhrif NP á MC og endaplata þurfa frekari rannsóknir.
Fimmtíu og fjórum karlkyns Nýja-Sjálandi hvítum kanínum (þyngd um 2,5-3 kg, 3-3,5 mánaða aldur) var skipt af handahófi í skammaraðgerðarhóp, vöðvaígræðsluhóp (ME Group) og taugarrótarígræðsluhópur (NPE Group). Allar tilraunaaðferðir voru samþykktar af siðanefnd Tianjin sjúkrahússins og tilraunaaðferðirnar voru gerðar í ströngum í samræmi við samþykktar leiðbeiningar.
Nokkrar endurbætur hafa verið gerðar á skurðaðgerð S. Sobajima 46. Hver kanína var sett í hliðarstöðu og fremri yfirborð fimm lendarhryggs í röð (IVD) var afhjúpað með því að nota afturvirkt afturvirkni. Hver kanína fékk almenna svæfingu (20% urethan, 5 ml/kg um eyrnaæð). Lengdar skurður í húð var gerður frá neðri brún rifbeinanna að mjaðmagrindinni, 2 cm miðlægi að paravertebral vöðvunum. Réttur hrygghryggur frá L1 til L6 var útsettur með skörpum og barefli dreifingu yfirliggjandi vefja undir húð, afturvef og vöðva (mynd 6A). Diskstigið var ákvarðað með því að nota grindarholsbrim sem líffærafræði fyrir L5-L6 diskstigið. Notaðu 16 gauge stungu nál til að bora gat nálægt endaplötunni á L5 hryggjarliðinu að 3 mm dýpi (mynd 6b). Notaðu 5 ml sprautu til að sogast á sjálfvirkan kjarna pulposus í L1-L2 millirdebralskífunni (mynd 6C). Fjarlægðu kjarna pulposus eða vöðva í samræmi við kröfur hvers hóps. Eftir að borholið er dýpkað eru frásogandi saumar settir á djúpa heillin, yfirborðskennd heill og húð og gæta þess að skemma ekki periosteal vefi hryggjarliðsins meðan á skurðaðgerð stendur.
(A) L5 - L6 diskurinn er útsettur með afturvirkni afturvirkni. (B) Notaðu 16 gauge nál til að bora gat nálægt L5 endaplötunni. (C) Sjálfvirk MFs eru safnað.
Almenn svæfing var gefin með 20% uretan (5 ml/kg) sem gefin var um eyrnagæð og geislamyndir í lendarhrygg voru endurteknar 12, 16 og 20 vikum eftir aðgerð.
Kanínum var fórnað með inndælingu ketamíns í vöðva (25,0 mg/kg) og natríumpentobarbital í bláæð (1,2 g/kg) við 12, 16 og 20 vikum eftir aðgerð. Allur hryggurinn var fjarlægður til vefjafræðilegrar greiningar og raunveruleg greining var gerð. Töluleg öfug umritun (RT-qPCR) og Western blotting voru notuð til að greina breytingar á ónæmisþáttum.
Hafrannsóknastofnunin var gerð hjá kanínum með því að nota 3,0 t klíníska segull (GE Medical Systems, Florence, SC) búin með rétthyrndum viðtakanda. Kanínur voru svæfðir með 20% uretan (5 ml/kg) um eyrnaæð og síðan settir stuði innan segilsins með lendarhryggnum miðju á 5 tommu þvermál hringlaga yfirborðsspólu (GE lækningakerfi). Kransæða T2-vegnar staðbundnar myndir (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) voru fengnar til að skilgreina staðsetningu lendardisksins frá L3-L4 til L5-L6. Sagittal plan T2-vegnar sneiðar voru fengnar með eftirfarandi stillingum: Fast Spin-Echo röð með endurtekningartíma (TR) upp á 2200 ms og bergmálstíma (TE) 70 ms, fylki; sjónsvið 260 og átta áreiti; Skurðarþykktin var 2 mm, bilið var 0,2 mm.
Eftir að síðasta ljósmyndin var tekin og síðasta kanínan var drepin, voru svindl, vöðvaþéttar og NP diskar fjarlægðir til vefjafræðilegrar skoðunar. Vefir voru festir í 10% hlutlausu buffaðri formalíni í 1 viku, afkallað með etýlendíaminetraediksýru og paraffín skipt. Vefjablokkir voru felldir inn í parafín og skornar í sagittal hluta (5 μm þykkt) með því að nota örtóm. Hlutar voru litaðir með hematoxýlíni og eósíni (H&E).
Eftir að hafa safnað millistigum diska frá kanínunum í hverjum hópi var heildar RNA dregið út með því að nota Uniq-10 dálk (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kína) samkvæmt leiðbeiningum framleiðandans og óundirbúinn II öfug umritunarkerfi (Promega Inc. , Madison, WI, Bandaríkjunum). Andstæða umritun var framkvæmd.
RT-qPCR var framkvæmt með því að nota PRISM 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) og SYBR Green Jump Start Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) samkvæmt leiðbeiningum framleiðandans. PCR hvarfrúmmálið var 20 μl og innihélt 1,5 μl af þynntu cDNA og 0,2 μM af hverjum grunni. Grunnur voru hannaðir af Oligoperfect hönnuðum (Invitrogen, Valencia, CA) og framleiddir af Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kína) (tafla 1). Eftirfarandi hitauppstreymisskilyrði voru notuð: Upphaflega virkjunarskref fjölliðu við 94 ° C í 2 mínútur, síðan 40 lotur af 15 sekúndur hver við 94 ° C fyrir sniðmát afneitun, glitun í 1 mínútu við 60 ° C, framlengingu og flúrljómun. Mælingar voru gerðar í 1 mínútur við 72 ° C. Öll sýni voru magnuð þrisvar og meðalgildið var notað við RT-qPCR greiningu. Magnagögn voru greind með FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, Bandaríkjunum). IL-4, IL-17 og IFN-γ genatjáning voru normaliseruð að innrænu stjórnun (ACTB). Hlutfallslega tjáningarstig markmrNA var reiknað með 2-ΔΔCt aðferðinni.
Heildarprótein var dregið út úr vefjum með því að nota vefjameðferð í vefjum í RIPA -lýsisjafnalausn (sem innihélt próteasa og fosfatasa hemla kokteil) og síðan skilvindt við 13.000 snúninga á mínútu í 20 mínútur við 4 ° C til að fjarlægja rusl í vefjum. Fimmtíu míkrógrömm af próteini voru hlaðin á hverja akrein, aðskilin með 10% SDS-PAGE, og síðan flutt í PVDF himnu. Blokkun var framkvæmd í 5% þurrmjólk sem ekki var feitur í Tris-jafnalausu saltvatni (TBS) sem innihélt 0,1% Tween 20 í 1 klukkustund við stofuhita. Himnan var ræktað með aðal mótefni gegn dekoríni (þynnt 1: 200; Boster, Wuhan, Kína) (þynnt 1: 200; Bioss, Peking, Kína) á einni nóttu við 4 ° C og brugðist við á öðrum dögum; með aukamótefni (geit gegn kanínu ónæmisglóbúlíni við 1: 40.000 þynningu) ásamt piparrót peroxídasa (Boster, Wuhan, Kína) í 1 klukkustund við stofuhita. Western blot merki greindust með aukinni lyfjameðferð á efnafræðilegu himnunni eftir geislun röntgengeislun. Fyrir þéttingargreiningar voru blettir skannaðir og magnaðir með því að nota bandscan hugbúnað og niðurstöðurnar voru gefnar upp sem hlutfall markgena ónæmisvirkni og ónæmisvirkni tubulin.
Tölfræðilegir útreikningar voru gerðir með SPSS16.0 hugbúnaðarpakka (SPSS, USA). Gögn sem safnað var meðan á rannsókninni stóð voru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik (meðaltal ± SD) og greind með því að nota einstefnu endurteknar mælingargreiningar á dreifni (ANOVA) til að ákvarða mun á milli hópanna tveggja. P <0,05 var talið tölfræðilega marktækt.
Þannig getur stofnun dýralíkans af MC með því að græða sjálfstætt NP í hryggjarliðum og framkvæma þjóðhagslega athugun, Hafrannsóknastofnun greiningar, vefjafræðilegs mats og sameinda líffræðilegrar greiningar orðið mikilvægt tæki til að meta og skilja fyrirkomulag manna MC og þróa nýja lækninga inngrip.
Hvernig á að vitna í þessa grein: Han, C. o.fl. Dýralíkan af líklegum breytingum var komið á með því að græða sjálfstætt kjarna pulposus í subchondral bein lendarhryggsins. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., og Boos, N. Segulómun á lendarhrygg: algengi disks hernia . Einkunn. Radiology 209, 661–666, doi: 10.1148/geislalækningar.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS og Leboeuf-Eeed, K. Modic breytingar og tengsl þeirra við klínískar niðurstöður. European Spine Journal: Opinber útgáfa European Spine Society, European Society of Mænu vansköpunin og European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, DOI: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., o.fl. Modískar breytingar á endaplötum í lendarhrygg: algengi og tengsl við litla bakverk og sciatica hjá miðaldra karlkyns starfsmönnum. Hrygg 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.Brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., og Dalinka, M. Hafrannsóknastofnun beinmergsbreytinga nálægt endaplötunni í hrörnunarsjúkdómi í lendarhryggnum. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/AJR.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, og Carter, JR hrörnunarsjúkdómur: Mat á hryggjarliðum á hryggjarliðum með Hafrannsóknastofnuninni. Geislalækning 166, 193–199, doi: 10.1148/geislalækningar.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS og Carter, JR myndgreining á hrörnunarsjúkdómi. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/geislalækningar.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, o.fl. Spámenn um endplata endplata (Modic) merki hjá almenningi. European Spine Journal: Opinber útgáfa European Spine Society, European Society of Mænu vansköpunin og European Society for Cervical Spine Research, deild 19, 129–135, DOI: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB og Mannisch, K. Modic breytingar eftir herningu í lendarhrygg. European Spine Journal: Opinber útgáfa European Spine Society, European Society of Spinal Deformity and European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, DOI: 10.1007/S00586-007-0336-8 (2007).
Kertula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., og Kaapa, E. Modic tegund I breytingar geta spáð hratt framsækinni aflögunarskífu hrörnun: 1 árs tilvonandi rannsókn. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
HU, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ og Fan, SW Modic breytingar: Hugsanlegar orsakir og framlag til hrörnun í lendarhrygg. Læknis tilgátur 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV innri diskur rof. Vandamál í diskum yfir 50 ár. Hrygg (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Post Time: Des-13-2024