Þakka þér fyrir að heimsækja Nature.com. Vafraútgáfan sem þú notar hefur takmarkaðan CSS-stuðning. Til að ná sem bestum árangri mælum við með að nota nýrri vafra (eða slökkva á samhæfingarstillingu í Internet Explorer). Á meðan, til að tryggja áframhaldandi stuðning, munum við birta síðuna án stíla og JavaScript.
Að byggja upp dýralíkön fyrir vöðvaígræðslu (e. modic change, MC) er mikilvægur grunnur að rannsóknum á MC. Fimmtíu og fjórum nýsjálenskum hvítum kanínum var skipt í hóp sem fékk sýndaraðgerð, hóp sem fékk vöðvaígræðslu (ME hóp) og hóp sem fékk kjarna pulposus ígræðslu (NPE hóp). Í NPE hópnum var milliliðsdiskurinn afhjúpaður með skurðaðgerð að framan og hlið lendarhryggjar og nál notuð til að stinga L5 hryggjarliðinn nálægt endaplötunni. NP var dregið úr L1/2 milliliðsdiskinum með sprautu og sprautað í hann. Gat var borað í undirbrjóskbeinið. Skurðaðgerðirnar og borunaraðferðirnar í hópnum sem fékk vöðvaígræðslu og hópnum sem fékk sýndaraðgerð voru þær sömu og í hópnum sem fékk NP ígræðslu. Í ME hópnum var vöðvabútur settur í gatið, en í hópnum sem fékk sýndaraðgerð var ekkert sett í gatið. Eftir aðgerðina voru framkvæmdar segulómskoðun og sameindalíffræðilegar prófanir. Merkið í NPE hópnum breyttist, en engin augljós breyting var á merkinu í hópnum sem fékk sýndaraðgerðina og ME hópnum. Vefjafræðilegar athuganir sýndu að óeðlileg vefjafjölgun sást á ígræðslustaðnum og tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ jókst í NPE hópnum. Ígræðsla NP í undirbrjóskbein getur myndað dýralíkan af MC.
Breytingar á Modic-heilkenni (e. Modic changes, MC) eru meinsemdir á endaplötum hryggjarliða og aðliggjandi beinmerg sem sjást á segulómun (MRI). Þær eru nokkuð algengar hjá einstaklingum með tengd einkenni1. Margar rannsóknir hafa lagt áherslu á mikilvægi MC vegna tengsla þess við verki í mjóbaki2,3. de Roos o.fl.4 og Modic o.fl.5 lýstu, hvor fyrir sig, þremur mismunandi gerðum af frávikum í undirbrjóski í beinmerg hryggjarliða. Breytingar af gerð I af Modic-heilkenni eru lágþrýstingur á T1-vegnum (T1W) röðum og ofþrýstingur á T2-vegnum (T2W) röðum. Þessi meinsemd sýnir sprunguendaplötur og aðliggjandi æðakornunarvef í beinmerg. Breytingar af gerð II af Modic-heilkenni sýna mikið merki bæði á T1W og T2W röðum. Í þessari tegund meinsemdar má finna eyðileggingu endaplötunnar, sem og vefjafræðilega fituuppnun á aðliggjandi beinmerg. Breytingar af gerð III af Modic-heilkenni sýna lítið merki í T1W og T2W röðum. Húðslíðrandi meinsemdir sem samsvara endaplötunum hafa sést6. MC er talinn sjúklegur sjúkdómur í hrygg og tengist náið mörgum hrörnunarsjúkdómum í hryggnum7,8,9.
Með hliðsjón af fyrirliggjandi gögnum hafa nokkrar rannsóknir veitt ítarlega innsýn í orsök og sjúklegan feril MC. Albert o.fl. bentu á að MC gæti stafað af brjósklosi8. Hu o.fl. rekja MC til alvarlegrar brjóskrabbameinsrýrnunar10. Kroc lagði til hugtakið „innri brjósklos“, sem segir að endurtekin brjóskáverka geti leitt til örrifa í endaplötunni. Eftir myndun klofnings getur eyðilegging endaplötunnar af völdum kjarna pulposus (NP) kallað fram sjálfsofnæmisviðbrögð, sem leiðir enn frekar til þróunar MC11. Ma o.fl. voru svipaðrar skoðunar og greindu frá því að NP-völd sjálfsofnæmi gegni lykilhlutverki í meingerð MC12.
Frumur ónæmiskerfisins, sérstaklega CD4+ T hjálpareitilfrumur, gegna mikilvægu hlutverki í meingerð sjálfsofnæmis13. Nýlega uppgötvaða Th17 undirhópurinn framleiðir bólguvaldandi frumuboðefnið IL-17, stuðlar að tjáningu chemokína og örvar T frumur í sködduðum líffærum til að framleiða IFN-γ14. Th2 frumur gegna einnig einstöku hlutverki í meingerð ónæmissvörunar. Tjáning IL-4 sem dæmigerðrar Th2 frumu getur leitt til alvarlegra ónæmismeinafræðilegra afleiðinga15.
Þó að margar klínískar rannsóknir hafi verið gerðar á MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, þá er enn skortur á hentugum dýratilraunum sem geta hermt eftir MC ferlinu sem oft á sér stað hjá mönnum og hægt er að nota til að rannsaka orsök þess eða nýjar meðferðir eins og markvissa meðferð. Hingað til hafa aðeins fáein dýralíkön af MC verið tilkynnt til að rannsaka undirliggjandi sjúklegar ferla.
Byggt á sjálfsofnæmiskenningunni sem Albert og Ma lögðu til, kom þessi rannsókn á fót einföldu og endurtakanlegu líkani af MC í kanínum með sjálfígræðslu nanóagna nálægt boraðri hryggjarliðsplötu. Önnur markmið eru að fylgjast með vefjafræðilegum einkennum dýralíkananna og meta sértæka ferla nanóagna í þróun MC. Í þessu skyni notum við aðferðir eins og sameindalíffræði, segulómun og vefjafræðilegar rannsóknir til að rannsaka framgang MC.
Tvær kanínur dóu úr blæðingum í aðgerð og fjórar kanínur dóu á meðan svæfingu stóð yfir á segulómun. Hinar 48 kanínurnar lifðu af og sýndu engin hegðunar- eða taugaeinkenni eftir aðgerð.
Segulómun sýnir að merkjastyrkur vefjarins sem er festur í mismunandi götum er mismunandi. Merkjastyrkur L5 hryggjarliðsins í NPE hópnum breyttist smám saman 12, 16 og 20 vikum eftir ísetningu (T1W röðin sýndi lágt merki og T2W röðin sýndi blandað merki ásamt lágu merki) (Mynd 1C), en segulómskoðun á útliti hinna tveggja hópanna af innfelldum hlutum hélst tiltölulega stöðug á sama tímabili (Mynd 1A, B).
(A) Dæmigerðar raðbundnar segulómunarmyndir af lendarhrygg kanínu á þremur tímapunktum. Engin merkjafrávik fundust á myndum hópsins sem fékk sýndaraðgerð. (B) Merkjaeinkenni hryggjarliðsins í ME hópnum eru svipuð og í hópnum sem fékk sýndaraðgerð og engin marktæk merkjabreyting sést á innfellingarstað með tímanum. (C) Í NPE hópnum er lágt merki greinilega sýnilegt í T1W röðinni og blandað merki og lágt merki eru greinilega sýnileg í T2W röðinni. Frá 12 vikna tímabilinu til 20 vikna tímabilsins minnka einstaka há merki í kringum lágu merkin í T2W röðinni.
Greinileg beinvöxtur sést á ígræðslustað hryggjarliðsins í NPE hópnum, og beinvöxturinn kemur hraðar fram frá 12 til 20 vikum (Mynd 2C) samanborið við NPE hópinn, engin marktæk breyting sést í hryggjarliðunum sem voru líkönuð; sýndarhópnum og ME hópnum (Mynd 2C) 2A,B).
(A) Yfirborð hryggjarliðsins á ígrædda staðnum er mjög slétt, gatið græðir vel og engin ofvöxtur er í hryggjarliðnum. (B) Lögun ígrædda svæðisins í ME hópnum er svipuð og í hópnum sem fékk sýndaraðgerð og engin augljós breyting er á útliti ígrædda svæðisins með tímanum. (C) Beinofvöxtur kom fram á ígrædda staðnum í NPE hópnum. Beinofvöxturinn jókst hratt og náði jafnvel út í gegnum milliliðsdiskinn að hinum hryggjarliðnum.
Vefjafræðileg greining veitir ítarlegri upplýsingar um beinmyndun. Mynd 3 sýnir ljósmyndir af sneiðum eftir aðgerð litaðar með H&E. Í hópnum sem gekkst undir sýndaraðgerð voru brjóskfrumurnar vel raðaðar og engin frumufjölgun greindist (Mynd 3A). Aðstæðurnar í ME hópnum voru svipaðar og í hópnum sem gekkst undir sýndaraðgerð (Mynd 3B). Hins vegar sást fjöldi brjóskfrumu og fjölgun NP-líkra frumna á ígræðslustaðnum í NPE hópnum (Mynd 3C);
(A) Brotfrumur sjást nálægt endaplötunni, brjóskfrumurnar eru snyrtilega raðaðar með einsleitri frumustærð og lögun og enga fjölgun (40 sinnum). (B) Ástand ígræðslustaðarins í ME hópnum er svipað og í sýndarhópnum. Brotfrumur og brjóskfrumur sjást en engin augljós fjölgun er á ígræðslustaðnum (40 sinnum). (B) Það sést að brjóskfrumur og NP-líkar frumur fjölga sér verulega og lögun og stærð brjóskfrumnanna eru ójöfn (40 sinnum).
Tjáning interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA og interferon γ (IFN-γ) mRNA sást bæði í NPE og ME hópunum. Þegar tjáningarstig markgena voru borin saman jókst genatjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ marktækt í NPE hópnum samanborið við ME hópinn og hópinn sem fékk sýndaraðgerð (Mynd 4) (P < 0,05). Í samanburði við hópinn sem fékk sýndaraðgerð jókst tjáningarstig IL-4, IL-17 og IFN-γ í ME hópnum aðeins lítillega og breyttist ekki tölfræðilega (P > 0,05).
mRNA tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ í NPE hópnum sýndi marktækt hærri tilhneigingu en í hópunum sem fengu sýndaraðgerð og ME hópnum (P < 0,05).
Hins vegar sýndi tjáningarstig í ME hópnum engan marktækan mun (P>0,05).
Western blot greining var framkvæmd með því að nota mótefni gegn IL-4 og IL-17 sem fást í verslunum til að staðfesta breytt mRNA tjáningarmynstur. Eins og sést á myndum 5A og B, var próteinmagn IL-4 og IL-17 í NPE hópnum marktækt aukið (P < 0,05) samanborið við hópinn sem fékk sýndaraðgerð. Ekki var heldur marktæk breyting á próteinmagni IL-4 og IL-17 í ME hópnum (P > 0,05) samanborið við hópinn sem fékk sýndaraðgerð.
(A) Próteinmagn IL-4 og IL-17 í NPE hópnum var marktækt hærra en í ME hópnum og lyfleysuhópnum (P < 0,05). (B) Western blot súlurit.
Vegna takmarkaðs fjölda sýna úr mönnum sem fengust við skurðaðgerðir er nokkuð erfitt að framkvæma skýrar og ítarlegar rannsóknir á meingerð MC. Við reyndum að koma á fót dýralíkani af MC til að rannsaka hugsanlega meinafræðilega ferla þess. Á sama tíma var geislafræðilegt mat, vefjafræðilegt mat og sameindalíffræðilegt mat notað til að fylgja gangi MC sem framkallaður var af NP sjálfígræðslu. Fyrir vikið leiddi NP ígræðslulíkanið til stigvaxandi breytinga á merkjastyrk frá 12 vikna tímapunktum til 20 vikna (blandað lágt merki í T1W röðum og lágt merki í T2W röðum), sem benti til vefjabreytinga, og vefjafræðilegt og sameindalíffræðilegt mat staðfesti niðurstöður geislafræðilegu rannsóknarinnar.
Niðurstöður þessarar tilraunar sýna að sjónrænar og vefjafræðilegar breytingar áttu sér stað á þeim stað þar sem hryggjarliðurinn rofnaði í NPE hópnum. Á sama tíma sást tjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ gena, sem og IL-4, IL-17 og IFN-γ, sem bendir til þess að rof á sjálfsfrumu kjarna pulposus í hryggjarliðnum geti valdið röð merkja- og formfræðilegra breytinga. Auðvelt er að sjá að merkjaeinkenni hryggjarliða í dýralíkaninu (lágt merki í T1W röðinni, blandað merki og lágt merki í T2W röðinni) eru mjög svipuð og í hryggjarliðsfrumum manna, og segulómskoðunareiginleikar staðfesta einnig athuganir á vefjafræði og heildarlíffærafræði, þ.e. breytingarnar í hryggjarliðsfrumunum eru stigvaxandi. Þó að bólgusvörun af völdum bráðs áverka geti komið fram fljótlega eftir ástungu, sýndu niðurstöður segulómskoðunar að stigvaxandi merkjabreytingar komu fram 12 vikum eftir ástungu og héldu áfram í allt að 20 vikur án nokkurra merkja um bata eða viðsnúning á segulómskoðunarbreytingum. Þessar niðurstöður benda til þess að eigin hryggjarliðsnaprun sé áreiðanleg aðferð til að staðfesta framsækna MV í kanínum.
Þessi stungulíkan krefst nægilegrar færni, tíma og skurðaðgerðar. Í fortilraunum getur sundurliðun eða óhófleg örvun á liðböndum paravertebralsins leitt til myndunar hryggjarliða. Gæta skal þess að skemma ekki eða erta aðliggjandi diska. Þar sem stjórna verður dýpt inndráttarins til að fá samræmdar og endurtakanlegar niðurstöður, bjuggum við handvirkt til tappa með því að skera af slíðrið af 3 mm langri nál. Notkun þessa tappa tryggir jafna borunardýpt í hryggjarliðnum. Í fortilraunum komust þrír bæklunarlæknar sem tóku þátt í aðgerðinni að því að 16-gauge nálar væru auðveldari í notkun en 18-gauge nálar eða aðrar aðferðir. Til að forðast óhóflega blæðingu við borun mun það að halda nálinni kyrrum um stund veita hentugri innsetningargat, sem bendir til þess að hægt sé að stjórna ákveðnu magni af blæðingu á þennan hátt.
Þó að margar rannsóknir hafi beinst að MC, er lítið vitað um orsök og meingerð MC25,26,27. Byggt á fyrri rannsóknum okkar komumst við að því að sjálfsofnæmi gegnir lykilhlutverki í tilurð og þróun MC12. Þessi rannsókn skoðaði megindlega tjáningu IL-4, IL-17 og IFN-γ, sem eru helstu sérhæfingarleiðir CD4+ frumna eftir örvun mótefnavaka. Í okkar rannsókn, samanborið við neikvæða hópinn, hafði NPE hópurinn meiri tjáningu á IL-4, IL-17 og IFN-γ, og próteinmagn IL-4 og IL-17 var einnig hærra.
Klínískt séð er mRNA tjáning IL-17 aukin í NP frumum frá sjúklingum með brjósklos28. Aukin tjáning á IL-4 og IFN-γ fannst einnig í líkani af bráðri brjósklos án þrýstings samanborið við heilbrigða samanburðarhópa29. IL-17 gegnir lykilhlutverki í bólgu, vefjaskaða í sjálfsofnæmissjúkdómum30 og eykur ónæmissvörun við IFN-γ31. Greint hefur verið frá auknum vefjaskaða af völdum IL-17 í MRL/lpr músum32 og músum sem eru viðkvæmar fyrir sjálfsofnæmi33. IL-4 getur hamlað tjáningu bólguvaldandi frumuboða (eins og IL-1β og TNFα) og virkjun átfrumna34. Greint var frá því að mRNA tjáning IL-4 væri önnur í NPE hópnum samanborið við IL-17 og IFN-γ á sama tímapunkti; mRNA tjáning IFN-γ í NPE hópnum var marktækt hærri en í hinum hópunum. Því gæti IFN-γ framleiðsla verið miðlari bólgusvörunarinnar sem framkölluð er af NP innskoti. Rannsóknir hafa sýnt að IFN-γ er framleitt af mörgum frumugerðum, þar á meðal virkjuðum T-hjálparfrumum af gerð 1, náttúrulegum drápsfrumum og átfrumum35,36, og er lykil bólguvaldandi frumuboðefni sem stuðlar að ónæmissvörun37.
Þessi rannsókn bendir til þess að sjálfsofnæmisviðbrögð gætu átt þátt í tilurð og þróun MC. Luoma o.fl. komust að því að merkjaeinkenni MC og áberandi NP eru svipuð á segulómun og bæði sýna hátt merki í T2W röð38. Sum frumuboðefni hafa reynst nátengd tilurð MC, svo sem IL-139. Ma o.fl. bentu á að upp- eða niðurútstæð NP gæti haft mikil áhrif á tilurð og þróun MC12. Bobechko40 og Herzbein o.fl.41 greindu frá því að NP er ónæmisþolinn vefur sem getur ekki komist inn í æðakerfið frá fæðingu. NP-útstæðingar leiða aðskotahluti inn í blóðrásina og miðla þannig staðbundnum sjálfsofnæmisviðbrögðum42. Sjálfsofnæmisviðbrögð geta örvað fjölda ónæmisþátta og þegar þessir þættir eru stöðugt útsettir fyrir vefjum geta þeir valdið breytingum á merkjagjöf43. Í þessari rannsókn eru ofurtjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ dæmigerðir ónæmisþættir, sem sannar enn frekar náið samband milli NP og MC44. Þessi dýralíkan líkir vel eftir því hvernig NP fer í gegnum og fer inn í endaplötuna. Þetta ferli leiddi enn frekar í ljós áhrif sjálfsofnæmis á MC.
Eins og búist var við veitir þetta dýralíkan okkur mögulegan vettvang til að rannsaka MC. Hins vegar hefur þetta líkan enn nokkrar takmarkanir: í fyrsta lagi þarf að aflífa sumar kanínur á millistigi á dýraathugunarstigi vegna vefjafræðilegra og sameindalíffræðilegra prófana, þannig að sum dýr „falla úr notkun“ með tímanum. Í öðru lagi, þó að þrír tímapunktar séu settir í þessari rannsókn, þá líkjuðum við því miður aðeins eftir einni gerð af MC (Modic tegund I breytingu), þannig að það er ekki nóg til að tákna þróunarferli sjúkdóma hjá mönnum, og fleiri tímapunktar þurfa að vera settir til að fylgjast betur með öllum merkjabreytingum. Í þriðja lagi er hægt að sýna breytingar á vefjabyggingu greinilega með vefjafræðilegri litun, en sumar sérhæfðar aðferðir geta betur sýnt örbyggingarbreytingar í þessu líkani. Til dæmis var smásjárskoðun með skautunarljósi notuð til að greina myndun trefjabrjósks í milliliðsdiskum kanína45. Langtímaáhrif NP á MC og endaplötu þarfnast frekari rannsókna.
Fimmtíu og fjórir karlkyns nýsjálenskir hvítir kanínur (þyngd um 2,5-3 kg, aldur 3-3,5 mánaða) voru skipt af handahófi í hóp sem fór í sýndaraðgerðir, hóp sem fékk vöðvaígræðslu (ME hóp) og hóp sem fékk taugarótarígræðslu (NPE hóp). Allar tilraunir voru samþykktar af siðanefnd Tianjin-sjúkrahússins og tilraunaaðferðirnar voru framkvæmdar í ströngu samræmi við samþykktar leiðbeiningar.
Nokkrar úrbætur hafa verið gerðar á skurðtækni S. Sobajima 46. Hver kanína var sett í hliðlæga liggjandi stöðu og fremri hluti fimm samliggjandi lendarhryggjarliða (IVD) var afhjúpaður með aftari hlið aftan við kviðarholið. Hver kanína var svæfð (20% uretan, 5 ml/kg í gegnum eyrnabláæð). Langsskurður á húð var gerður frá neðri brún rifbeina að grindarbrúninni, 2 cm frá kviðarholsvöðvunum. Hægri framhliðar hryggurinn frá L1 til L6 var afhjúpaður með hvassri og sljóri aðgerð á yfirliggjandi undirhúðarvef, vef aftan við kviðarholið og vöðvum (Mynd 6A). Diskhæðin var ákvörðuð með því að nota grindarbrúnina sem líffærafræðilegt kennileiti fyrir L5-L6 diskhæðina. Notið 16-gauge stungusnál til að bora gat nálægt endaplötu L5 hryggjarliðsins niður í 3 mm dýpi (Mynd 6B). Notið 5 ml sprautu til að draga upp sjálfsofnæmi kjarnans (nucleus pulposus) úr milliliðsdiski L1-L2 (Mynd 6C). Fjarlægið kjarnann eða vöðvann í samræmi við kröfur hvers hóps. Eftir að borholan hefur verið dýpkuð eru frásogandi saumar settir á djúpa bandvefinn, yfirborðsbandvefinn og húðina, og þess gætt að skemma ekki beinhimnuvefinn í hryggjarliðnum meðan á aðgerð stendur.
(A) Diskurinn á L5–L6 er tekinn í ljós með aðferð aftan við kviðarholið. (B) Borið er gat nálægt endaplötu L5 með nál af kaliber 16. (C) Sjálfsafleiddir fjölfrumur eru teknir.
Gefin var svæfing með 20% uretani (5 ml/kg) í gegnum eyrnabláæð og röntgenmyndir af lendarhrygg voru endurteknar 12, 16 og 20 vikum eftir aðgerð.
Kanínurnar voru aflífaðar með inndælingu ketamíns (25,0 mg/kg) og natríumpentobarbital (1,2 g/kg) í vöðva 12, 16 og 20 vikum eftir aðgerð. Allur hryggurinn var fjarlægður til vefjafræðilegrar greiningar og raunveruleg greining var framkvæmd. Megindleg öfug umritun (RT-qPCR) og Western blotting voru notuð til að greina breytingar á ónæmisþáttum.
Segulómun var gerð á kanínum með 3,0 T klínískum segli (GE Medical Systems, Florence, SC) útbúnum með rétthyrndum spólu fyrir útlimi. Kanínurnar voru svæfðar með 20% úretani (5 ml/kg) í gegnum eyrnabláæð og síðan lagðar á bakið innan segulsins með lendarhrygginn miðjuðan á 5 tommu þvermál hringlaga yfirborðsspólu (GE Medical Systems). T2-vegnar staðsetningarmyndir voru teknar með kransæðavegnum stað (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) til að skilgreina staðsetningu lendardisksins frá L3–L4 til L5–L6. T2-vegnar sneiðar með miðlínu voru teknar með eftirfarandi stillingum: hröð snúnings-bergmálsröð með endurtekningartíma (TR) upp á 2200 ms og bergmálstíma (TE) upp á 70 ms, fylki; sjónsvið 260 og átta áreita; Skurðþykktin var 2 mm, bilið var 0,2 mm.
Eftir að síðasta ljósmyndin hafði verið tekin og síðasta kanínan aflífuð, voru sýndarvefirnir, vöðvavefirnir og NP-diskarnir fjarlægðir til vefjafræðilegrar rannsóknar. Vefir voru festir í 10% hlutlausu formalínlausn í eina viku, afkalkaðir með etýlendíamíntetraediksýru og paraffínskornir. Vefjablokkir voru felldir inn í paraffín og skornir í miðlínusneiðar (5 μm þykkar) með örsneiðmyndatæki. Sneiðarnar voru litaðar með hematoxýlíni og eosíni (H&E).
Eftir að millihryggjarliðirnir höfðu verið safnaðir úr kanínunum í hverjum hópi var heildar-RNA dregið út með UNIQ-10 dálki (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kína) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda og ImProm II öfugumritunarkerfi (Promega Inc., Madison, WI, Bandaríkjunum). Öfug umritun var framkvæmd.
RT-qPCR var framkvæmd með Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., Bandaríkjunum) og SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Rúmmál PCR viðbragðsins var 20 μl og innihélt 1,5 μl af þynntu cDNA og 0,2 μM af hvorum praimer. Praimerarnir voru hannaðir af OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, Kaliforníu) og framleiddir af Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kína) (Tafla 1). Eftirfarandi hitahringrásarskilyrði voru notuð: upphaflegt pólýmerasavirkjunarskref við 94°C í 2 mínútur, síðan 40 hringrásir, 15 sekúndur hver, við 94°C fyrir denatúreringu sniðmátsins, glæðing í 1 mínútu við 60°C, framlenging og flúrljómun. Mælingar voru framkvæmdar í 1 mínútu við 72°C. Öll sýni voru mögnuð þrisvar sinnum og meðalgildið var notað fyrir RT-qPCR greiningu. Magnunargögn voru greind með FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, Kaliforníu, Bandaríkjunum). Genatjáning IL-4, IL-17 og IFN-γ var staðluð miðað við innræna viðmiðun (ACTB). Hlutfallsleg tjáningarstig markmRNA voru reiknuð með 2-ΔΔCT aðferðinni.
Heildarprótein var dregið úr vefjum með vefjajöfnunartæki í RIPA lýsisbuffer (sem innihélt próteasa og fosfatasahemilblöndu) og síðan skilvindað við 13.000 snúninga á mínútu í 20 mínútur við 4°C til að fjarlægja vefjarleifar. Fimmtíu míkrógrömm af próteini voru sett í hverja braut, aðskilin með 10% SDS-PAGE og síðan flutt yfir á PVDF himnu. Blokkun var framkvæmd í 5% léttmjólk í Tris-bufferaðri saltlausn (TBS) sem innihélt 0,1% Tween 20 í 1 klst. við stofuhita. Himnan var ræktuð með kanínu-decorín frummótefni (þynnt 1:200; Boster, Wuhan, Kína) (þynnt 1:200; Bioss, Peking, Kína) yfir nótt við 4°C og látið hvarfast á öðrum dögum; með aukamótefni (geita-and-kanínu immúnóglóbúlín G í þynningu 1:40.000) ásamt piparrótperoxídasa (Boster, Wuhan, Kína) í 1 klukkustund við stofuhita. Western blot merki voru greind með aukinni efnaljómun á efnaljómunarhimnunni eftir röntgengeislun. Fyrir þéttleikamælingargreiningu voru blett skönnuð og magngreind með BandScan hugbúnaði og niðurstöðurnar voru tjáðar sem hlutfall ónæmisvirkni markgensins og ónæmisvirkni túbúlíns.
Tölfræðilegar útreikningar voru framkvæmdir með SPSS16.0 hugbúnaðarpakkanum (SPSS, Bandaríkin). Gögnum sem safnað var í rannsókninni var gefið upp sem meðaltal ± staðalfrávik (meðaltal ± staðalfrávik) og greind með einhliða endurtekinni dreifigreiningu (ANOVA) til að ákvarða muninn á milli hópanna tveggja. P < 0,05 var talið tölfræðilega marktækt.
Þannig gæti stofnun dýralíkans af MC með því að ígræða sjálfsónæmisfrumur í hryggjarliðinn og framkvæma líffærafræðilegar athuganir, segulómun, vefjasýnatöku og sameindalíffræðilega greiningu orðið mikilvægt tæki til að meta og skilja ferla MC hjá mönnum og þróa nýjar meðferðarúrræði.
Hvernig á að vitna í þessa grein: Han, C. o.fl. Dýralíkan af Modic breytingum var komið á með því að græða sjálfsfrumukjarna (nucleus pulposus) í undirbrjóskbein lendarhryggsins. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., og Boos, N. Segulómun af lendarhrygg: tíðni brjósklos og -teppu, þrýstingur á taugarót, frávik í endaplötum og slitgigt í liðflötum hjá einkennalausum sjálfboðaliðum. tíðni. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, og Leboeuf-Eed, K. Breytingar á hryggjarliðum í Modic og tengsl þeirra við klínískar niðurstöður. European Spine Journal: opinber útgáfa European Spine Society, European Society of Spinal Deformity, og European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., o.fl. Breytingar á endaplötum lendarhryggjarliða: tíðni og tengsl við verki í mjóbaki og ischias hjá miðaldra karlkyns starfsmönnum. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., og Dalinka, M. Segulómun af breytingum á beinmerg nálægt endaplötunni við hrörnunarsjúkdóm í lendarhrygg. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, og Carter, JR Hrörnunarsjúkdómur í brjóskþekju: mat á breytingum í hryggjarliðsmerg með segulómun. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, og Carter, JR Myndgreining á hrörnunarsjúkdómi í brjóskþekju. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, o.fl. Spáþættir fyrir endaplötu nýrra hryggjarliða (Modic) gefa til kynna breytingar í almenningi. European Spine Journal: Opinber útgáfa European Spine Society, European Society of Spinal Deformity, and the European Society for Cervical Spine Research, Division 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB og Mannisch, K. Breytingar á Modic eftir brjósklos í lendarhrygg. European Spine Journal: Opinber útgáfa Evrópska hryggjafélagsins, Evrópska félagsins um hryggjamyndun og Evrópska félagsins um rannsóknir á hálshrygg 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., og Kaapa, E. Breytingar af gerð I í Modic geta spáð fyrir um hraða framvindu aflögunarbrjóskhryggjarýrnun: eins árs framsýn rannsókn. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ og Fan, SW. Breytingar á Modic: mögulegar orsakir og þáttur í hrörnun í lendarþelsbrjóski. Medical Hypotheses 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Innri brjósklos. Vandamál með brjósklos yfir 50 ár. Hryggur (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Birtingartími: 13. des. 2024